源头控制：完善的菌株构建与筛选，确保工艺稳健性
菌种库建立 · PCB建库与单克隆筛选流程 & 节点明细
平台概述
云心质力提供从质粒合成、构建到建库的全方位服务。建库前通过单克隆设计规划，确保 PCB 菌株在后续 MCB/WCB 及质粒生产中的稳定性与可放大性。菌种库严格依照《GMP》及相关药典要求进行建库与检定，全流程可追溯。
三级菌种库建库体系
覆盖 PCB → MCB → WCB 全建库链条，节点清晰、可控可溯
01
客户提供质粒
- 需序列或相应检测报告
- 入门检（浓度、酶切鉴定等）
02
质粒构建（如需）
- 云心拥有多自主研发骨架，可供客户选择
- 满足客户需求
- 提供序列一般合成、合成合成等服务
03
转化及基因工程菌挑选
- 将构建确认的质粒转化于不同感受态细胞中
- 挑选合适数量的单克隆
04
单克隆筛选
- RCB 建库
- 更全面的单克隆检测评估
- 根据需求与风险设计筛选流程
- 可包含传代稳定性、发酵工艺适用性
05
单克隆筛选（克隆）
- 单克隆经过平板划线增加单克隆纯度
- 确保后续工程菌株稳定性
- 如需 poly A 尾序、质粒构型检查（凝胶法）
06
PCB 建库
- 依据 GMP 要求制备主细胞库
- 完成建库报告与放行检测
✓ 云心可提供全方位的服务，从质粒合成、构建至建库
✓ 全面的单克隆设计规划，确保 PCB 菌株在后续 MCB/WCB 至质粒生产稳定性与可放大性
✓ 全面的单克隆设计规划，确保 PCB 菌株在后续 MCB/WCB 至质粒生产稳定性与可放大性
服务矩阵
覆盖菌种库建立与质粒生产全流程，满足不同申报阶段需求
| 服务项目 | Research | IIT | IND |
|---|---|---|---|
| PCB 的构建和检测 | √ | √ | √ |
| MCB 和 WCB 的构建和检定 | 依照客户需求 | √ | √ |
| 菌种库传代稳定性考察 | 依照客户需求 | 依照客户需求 | √ |
| 质粒生产工艺的优化 | √ | √ | — |
| Lockdown Run 工艺确认批生产 | 依照客户需求 | √ | √ |
| 质粒的生产与检定 | √ | √ | √ |
| 批生产记录和批检验记录 | 依照客户需求 | 依照客户需求 | √ |
| 产品检验报告（CoA） | √ | √ | √ |
| 相关溯源性材料 | 依照客户需求 | 依照客户需求 | √ |
| IND 申报服务 | — | — | √ |
菌种库的检定分析方法与参考标准
符合 GMP 与药典要求的全项检定，确保菌种库质量可控
| 序号 | 检测项目 | 方法 | 参考接受标准 |
|---|---|---|---|
| 1 | 菌落数（CFU/mL） | 平板计数法 | ≥ 1E6 CFU/mL |
| 2 | 菌落形态（Morphology） | 平板法 | 应呈典型大肠杆菌菌落形态 |
| 3 | 染色镜检 革兰氏染色（Gram Stain） | 染色镜检法 | 应为典型的革兰氏阴性杆菌 |
| 4 | 生化反应（Biochemical ID） | 生化法 | 应符合大肠杆菌生化反应特性 |
| 5 | 16S rDNA 序列分析 | 测序法 | 与大肠杆菌同源性 > 99% |
| 6 | 菌种纯度（Purity） | 平板法 | 纯培养物，无其他杂菌生长 |
| 7 | 抗生素抗性（Resistance） | 培养法 | 卡那霉素抗性 * |
| 8 | 质粒检查 | 电泳法 | 酶切图谱与理论一致 |
| 9 | 质粒保有率 | 通则 3406 | > 90% |
| 10 | 质粒拷贝数（Copy Number） | qPCR | 报告数值 |
| 11 | 质粒序列检查（Sequence） | 测序法 | 与理论序列一致 |
| 12 | 噬菌体（Phage Test） | 双层平板法 | 噬菌体阴性 |
| 13 | 电镜检查 | 电镜法 | 应为典型大肠埃希菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染 |
| 14 | 全基因组序列 | 测序法 | 报告结果 |
* 备注：如质粒带有抗性基因，则一般考虑卡那霉素抗性基因检测；如质粒不携带有抗性基因，则此方法不适用。
平台优势
源头把控，自主骨架
拥有多自主研发质粒骨架可供选择，从源头提升菌株稳定性
全流程服务
从质粒合成、构建到建库一站式完成，减少客户多供应商对接成本
GMP 合规体系
建库与检定流程严格遵循 GMP 及药典要求，全流程可追溯
申报经验丰富
支持 IND 申报阶段全套服务，含批记录、CoA 及溯源性材料